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15502280048
品牌 | 其他品牌 | 產地 | 國產 |
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級別 | 其他 | 規格 | 96T/48 |
糖原磷酸化酶 a(GPa)活性檢測試劑盒
微量法
規格:100T/96S
產品內容:使用請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系工作人員。
試劑名稱 規格 保存條件
提取液 液體 110mL×1 瓶 2-8℃保存
試劑一 液體 20mL×1 瓶 2-8℃保存
試劑二 粉劑×1 支 2-8℃保存
試劑三 粉劑×1 支 2-8℃保存
試劑四 粉劑×1 支 -20℃保存
試劑五 粉劑×2 支 -20℃保存
試劑六 粉劑×2 支 -20℃保存
溶液的配制:
1、 試劑二:臨用加入 0.5 mL 蒸餾水,充分混勻;
2、 試劑三:臨用加入 0.5 mL 蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存 4 周,避免反復凍融;
3、 試劑四:臨用加入 1.25 mL 蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存 4 周,避免反復凍融;
4、 試劑五:臨用取一支加入 1 mL 蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存 4 周,避免反復凍融;1 瓶粉劑即可做 100T,為延長使用時間,故多給一支。
5、 試劑六:臨用取一支加入 1 mL 蒸餾水,充分混勻;可分裝后-20℃保存 4 周,避免反復凍融;1 瓶粉劑即可做 100T,為延長使用時間,故多給一支。
6、 工作液的配制:臨用根據實驗所需用量,按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑四:蒸餾水=148μL:4μL: 4μL: 4μL: 10μL(1T 的量)的比例,充分混勻,現用現配。
產品說明:
糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關鍵酶,催化糖原的磷酸化反應。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶 a
(Glycogen phosphorylase a, GPa)和無活性的糖原磷酸化酶 b(Glycogen phosphorylase b, GPb)兩種形式。糖原的分解主要在糖原磷酸化酶 a 的催化下進行。未添加激活劑時,糖原磷酸化酶 a 催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和 1-磷酸葡糖,磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化 NADP 還原生成 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 上升速率,即可反映糖原磷酸化酶 a 活性。
注意:實驗之建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、恒溫培養箱/水浴鍋、研缽/勻漿器、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、組織:按照組織質量(g)︰提取液體積(mL)為 1︰5~10 的比例(建議稱取約 0.1 g 組織,加入 1 mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后 8000 g,4℃,離心 10 min,取上清置于冰上待測。
2、細菌或者細胞:先收集細胞或細菌樣本到離心管內,棄上清,按照每 500 萬細胞或細菌加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次)。8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿):直接檢測
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長至 340 nm,分光光度計蒸餾水調零。
2、 臨用工作液置于 37℃預熱 5min。
3、 在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中依次加入 10 μL 樣本、10 μL 試劑五、10 μL 試劑六、170 μL 工作液,充分混勻 10s,記錄 340nm 處 10s 時吸光值 A1,37℃水浴鍋或者恒溫培養箱反應 10min(酶標儀有控溫功能的可以調節溫度至 37℃),反應后拿出迅速擦干測定 10min10s 時吸光值 A2。計算 ΔA=A2-A1。
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